背景
有症状的艰难梭菌感染（CDI）具有较高的发病率和死亡率。然而，患者可能在出现症状的情况下感染，也可能在没有任何症状的情况下接种毒素。我们之前已证实，细菌中毒素的存在及其功能，以及儿童无症状感染，均可确诊为CDI，并探讨了其他因素的影响。本研究旨在探讨CDI、该疾病的症状以及微生物移植的症状。
方法
设计：病例研究。地点：产经宗理儿童医院。参与者数量：无症状核酸扩增（NAAT）细菌培养、幼儿观察及移植（n=50）。报告患儿症状（转入NAAT）（n=55）。完成16S rRNA导入及液相显色-质量代码微生物组合审查。
结果
相比之下，症状组合（即无症状与有症状的艰难梭菌感染）是微生物出现方面最显著的差异。有症状的艰难梭菌感染患者的大肠杆菌/志贺氏菌（ Benjamini-Hochberg 校正 q=3.94×10^-5）、嗜血杆菌（q =0.022）和吉氏杆菌（q=0.085）数量增加，而共生菌粪杆菌（ q=0.041）、布劳特氏菌（ q=0.041）和双歧杆菌（q =0.063）数量减少。我们观察到，有症状的艰难梭菌感染患者的微生物氯化物产生量和粪便氯化物产生量均有所下降。
结论
有症状的 CDI 患者体内不同微生物群的存在与无症状患者体内细菌的存在不同，并且有可能表达在症状发展过程中发生的影响。
关键词：毒素、药物、载体、替代品
艰难梭菌是一种具有较高发病率和死亡率的胃肠道病原体。另一方面，其机制尚不明确，在某些情况下，细菌可能不会被植入，也可能不会出现任何症状。无症状植入率在患有综合性癌症、炎症性肠病（IBD）、囊性纤维化（CF）等疾病的儿童中最高。目前，艰难梭菌感染（CDI）或其他原因引起的感染通常没有症状。然而，我们之前曾宣布，目前国内医疗部门尚未开展针对艰难梭菌的全面检测和毒素检测的临床实践。此外，其他患者可能同时存在类似的细菌菌株，并伴有症状和其他严重疾病。一个突出的重要问题是：不同患者的症状有哪些相似之处和不同之处？这对于以下几个方面很重要：（1）检查和检验变化（2）了解寄生细菌的病理生理保护机制。
然而，能够与艰难梭菌感染患者和无症状感染者体内微生物混合存在的微生物种类已经增加。如果之前的研究仅限于少量微生物，那么随着年龄增长，这种混合微生物的数量还会继续增加。
利用特定的医疗患者群体，我们能够识别出没有症状移植的有症状 CDI，并进一步了解微生物的重要微生物病理生理学。
方法
研究设计
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医疗顾问，拥有18年经验，于2017年7月至2019年12月在东京大学附属医院工作，并已获得患者的长期知情同意。该研究已获得特殊设备管理委员会的批准。所使用的REDCap设备数量将予以保密。
无症状种植行
癌症、囊性纤维化或炎症性肠病患者通常没有诊断症状。无需观察任何症状，参与者必须为非典型（布里斯托大便分类 6 或 7 型），且无法解释是否存在细菌感染或治疗。请携带原版书籍，并使用核酸检测 (NAAT) 的试用版。根据 NAAT 检测结果，将对儿童进行监测。
症状
腹部感染（24小时内≥3次不成形便，且症状急性变化）。这是一份既往健康儿童及其他综合征患者的综合名单。达成协议后，我们将在实际实验室收集剩余材料。输入方案对比表1。
样本处和临子检浵
收集后，邮件应冷藏，分拣后温度应保持在-80°C。无症状和有症状的参与者，使用Illumigene艰难梭性检测（ARUP实验室）。在医院临楼实验室进行N AAT检测，这是一种针对毒素B的检测方法，因为tcdB中存在细菌（灵敏度：90%，特异性：96%）。Meridian Biosciences公司的Premier®毒素A和B的检测结果显示毒素存在（灵敏度80.8%，特异性97.5%）。为了确定毒素在Vero细胞培养中的有效性，方法如上所述。
DNA采集和微生物组织简介
如上所述，基本序列DNA（Qiagen DNeasy PowerSoil试剂盒）、定向PCR（16S rRNA序列V4区）和末端序列（Illumina MiSeq 2×250 bp）的顺序如下。
16S rRNA 数论
通过 dada2 过程获得 16S rRNA 序列（可能）
微生物系统分析设备
本研究可使用16S rRNA（表1）。受邀前往保健中心和儿童医院就诊的CDI患者和CDI感染患者地理位置相同。
会计分析
大多数会计分析都在会计环境下进行。Alpha 日本 beta 多用途指数存在 ASV 水平使用 R 包 vegan 计算。Alpha 多用途指数与 Kruskal-Wallis 指数不同。使用 PERMANOVA（Bray-Cur）的 99,999 次置换。
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延长射精时间的效果是延长射精时间、延长射精时间、延长性交时间、延长性交时间、延长射精 时间。使用 R 包 MaAsLin2，其中实际微生物群在行数和细菌群数量方面存在大量变化，以及 ASV 水平作者姓名。我们的主要调整包括纳入全面的年龄、性别、组合症状和暴露史（抗生素、抑酸剂和住院手术）、内部变化以及正在进行的外部敏感性分析，第 (1) 部分。(2) 我们将确保组合的一致性，(2) 我们将确保我们拥有正确的儿童组合、对组合的全面分析以及性别组合的分析。使用 Benjamini-Hochberg 程序对不同的微生物分类群进行多次检查。世界上存在的主要微生物少于 5 种。
由此，分为<0.05和<0.10，则认为关联昼。
液相颜色 – 质量检测方法
本书中，我们使用氯酸改变酸的颜色，然后采用反相液相显色分析法。如何选择合适的仪器以及如何进行检查。定量分析的基准是氯酸，m/z 336→171，CE 30；氯化物-d5，m/z 341→170，CE 30。数值分析采用Thermo-Finnigan Xcaliber，定量水平采用标准曲线进行验证。原品（氯酸-d5）的含量均一，最终得到pmol/mg。使用GraphPad Prism软件进行Mann-Whitney U检验。
