食物成分是真菌群的控制因素，对真菌群的健康具有显著的调节作用。相关研究包括流行病学、高血压与健康状况改善以及低血压与疾病发生率（Reynolds et al., 2019）。然而，食物种类繁多，日常饮食选择众多，流行病学研究面临诸多挑战，尤其是在特定食物研究领域。在其居住地的条件下，开展了大量的独立研究。
因此，微生物群落发生了变化，变得高度多样化，包含超过10万种细菌、古细菌和真菌，并且自形成以来，其物理结构、效率和功能都存在显著差异（Blaak et al., 2020, Microbial Community Research）。此外，在日常饮用过程中，直接接触的产品种类很少，但与餐厅接触的产品种类繁多，而且产品的质量和数量并无差异。
大量患者能够吸收人体自身的功能；然而，胃肠道中存在着许多微生物，寄生方式也多种多样。各种膳食补充剂、特定微生物、重要的短链脂肪酸（SCFAs）、硝酸盐、氧化和发酵等过程都会影响人体健康（Van-Wehle和Vital，2024；Nireeksha等，2025）。例如，其中含量最丰富的SCFAs是特定微生物群落组成的主要原因，这也影响着它们的组成以及与其他微生物的交叉反应（Nireeksha等，2025）。本文探讨了SCFAs、食物成分、分子组成、微生物群落组成及其对Hitoshi Yukio的影响。
目前，我正在研究混合微生物对微生物群落的影响。研究内容包括多种混合微生物产生的可溶性膳食纤维的组成，其主要成分是糖类化合物（Ali et al., 2009）。研究涵盖了其内外效应，例如促进有益微生物（乳酸杆菌）的生长（Calame et al., 2008）、促进发酵以及提高长链和短链脂肪酸（SCFA）的含量（Alarifi et al., 2018）。此外，我还研究了可溶性和不溶性混合物，以及桑葚粉和桑皮的混合物。其主要抗菌成分是可刺激产生的短链脂肪酸（SCFA），这种短链脂肪酸能够刺激体外微生物引起的微生物群落变化（Van den Abbeele et al., 20）。唤起欲望，女性情感， 一夜情体验， 双人幻想，心跳加速，治疗，冰凉感 ，黑暗，男性悬吊，男性悬吊， 快速运动效果，男女性爱辅助， 勃起维持时间， 添加天然成分打造宜人泉水，阴阳扩张 ，物质品质释放，内容满足，点燃燃烧的欲望，火焰是阳刚的，男性系统是
21). 可以将各种物种结合起来，促进有益微生物的生长，提高短期脂肪酸强度，提高生产效率，并增加额外的生长量。
关于不同食物对人类健康影响的研究通常得出不确定的结果（Rodriguez et al., 2024）。大量研究已发表，治疗后特定细菌群落的数量有所增加，但在某些情况下，粪便短链脂肪酸（SCFA）的浓度并未维持稳定（Vinelli et al., 2022）。最近一项研究报告称，微生物群落组成变化了1.5%，不同个体之间的差异增加了82%（Rodriguez et al., 2024）。这是一种用于研究潜在微生物群落的标准化工具，反映了对不同物种的需求。
研究人類中微生物群調節是一個複雜的過程。 腸道類比系統的開發，如TIM-1（Venema，2015）和SHIME模型（Zhu等，2024），實現了從糞便材料衍生的結腸微生物群落的體外培養，儘管這些系統的通量有限。 高通量平臺（如i-screen）的引入進一步推進了對抗生素和各種益生元纖維對微生物群組成和代謝活性的評估（Fehlbaum等，2018;Schuren等，2019;Ladirat等，2013;Ladirat等，2014）。 i-screen平臺是一種多孔結腸體外發酵模型，使用專門設計以模擬結腸環境的培養基。 它允許通過使用來自人類供體的糞便微生物群，對膳食纖維代謝和其他化合物的影響進行受控研究（Schuren等，2019）。
此類平臺還可以包括多個個體微生物群供體，允許研究干預效果的個人化變化（Agamennone等，2023;Cantu-Jungles等，2025）。 儘管這些體外系統旨在類比在人類中觀察到的反應，但由於難以進行直接比較，可靠評估其翻譯價值仍然具有挑戰性。 以前將體外觀察到的微生物群變化與體內發生的微生物群變化相關的嘗試僅限於小型病例研究，通常依賴於未配對的供體材料（Rudzka等，2025;Van den Abbeele等，2023b; Van den Abbeele等，2023a）。 在本研究中，來自先前發表的臨床試驗（Eveleens Maarse等，2024）的54名參與者的微生物群組成變化，與使用來自全部54名參與者的糞便微生物群樣本測量的i-screen平臺結果相關聯。
本研究基於最近進行的人類膳食纖維干預試驗，該試驗調查了纖維補充對體內腸道微生物群組成的影響（Eveleens Maarse等，2024）。 使用來自相同參與者的基線糞便樣本，使用i-screen平臺評估纖維誘導的變化。 在此，我們直接比較在體外和體內觀察到的微生物群組成變化，以評估i-screen模型的翻譯潛力。 此外，我們還研究了纖維干預對SCFA產生的影響。 據我們所知，這是第一項在同一批受試者中相關體外和體內微生物群組成反應的研究。
材料和方法
臨床研究
本研究基於Eveleens Maarse等（2024）和Hogenelst等（2025）先前發表的臨床研究。 簡言之，我們進行了一項雙盲、隨機、安慰劑對照的交叉研究，包括兩個由8周洗脫期分隔的12周干預期（圖1）。
總共招募了65名健康參與者參加該研究。 為了最大化干預的潛在效果，選擇了具有增加的代謝風險的個體，定義為體重指數（BMI）在25-30 kg/m²之間，年齡範圍為45-70歲，平均每日膳食纖維攝入量低於30克（Eveleens Maarse等，2024）。 所有參與者在篩選期間均不得有臨床顯著異常。 關鍵排除標準包括在納入前3個月內使用抗生素、抗酸劑、瀉藥、他汀類藥物、止瀉藥、免疫調節劑或降糖藥物，以及在研究前7天內或研究期間使用伴隨藥物、維生素或膳食補充劑，但對乙醯氨基酚和布洛芬除外。 在65名入組參與者中，2名因使用抗生素被排除，1名因使用他汀類藥物被排除，2名因嚴重不良事件（SAEs）被排除，3名退出，3名不符合研究方案，最終有54名參與者納入最終分析。
所有參與者均按照《赫爾辛基宣言》提供書面知情同意。 研究方案獲得了荷蘭Assen的生物醫學研究倫理評估基金會獨立倫理委員會的批准。 該研究遵循良好臨床實踐（GCP）指南，並在Toetsingonline註冊處（編號NL71723.056.19）和 clinicaltrials.gov 註冊處（編號NCT04829396）進行了註冊。
治療
本交叉研究中54名健康志願者的治療方法與先前報告的相同（Eveleens Maarse等，2024;Hogenelst等，2025）。 參與者每天將13克粉末（纖維混合物或安慰劑）混合到液體中，持續12周。 膳食纖維混合物的配方確保每劑含有10克阿拉伯膠（AG）粉末（4,880型，A. seyal，德國Willy Benecke）和3克磨碎的胡蘿蔔粉（KaroPRO 1-26 SG，荷蘭Food Solutions Team B.V.）。 該混合物每13克含有10克纖維，相對於參與者的平均每日纖維攝入量（18.7±5.9克/天）代表了纖維消費水準的增加（Eveleens Maarse等，2024）。 安慰劑粉末僅含有棕色（Glucidex® 19）和白色（Glucidex® 17）麥芽糊精（法國Roquette）。
如果參與者在研究開始前7天內或研究期間消費夜色春藥網官網 夜色春藥網線上網店 夜色春藥熱銷商品推薦 關於夜色春藥網 夜色春藥網獨家資訊 夜色春藥網半價購買 夜色春藥網配送方式 夜色春藥網全部商品 夜色春藥網必買商品 夜色春藥網LINE直購 夜色春藥網折扣活動
了膳食補充劑（包括纖維），則將其排除，以防止其他纖維治療的潛在干擾。 他們被指示在整個研究期間保持穩定的飲食，並避免引入新的飲食習慣或膳食方案。 使用荷蘭健康飲食指數（DHDI）跟蹤飲食維持情況，該指數在研究期間保持不變（Eveleens Maarse等，2024;de Rijk等，2021）。 通過在每個幹預期結束時收集空的纖維補充劑或安慰劑罐來評估依從性。 罐子被稱重以計算總攝入量，消耗至少80%指定劑量的參與者被視為依從的。 在每次研究訪問和干預期間定期電話中監測對研究限制（例如，避免伴隨藥物）的依從性和不良事件的發生。
纖維的厭氧發酵
TNO的i-screen模型的詳細資訊已發表（Schuren等，2019）。 在此，我們使用了稍作修改的平臺。 簡言之，糞便材料在每個幹預期前收集在eSWAB管中，冷凍直至進一步使用。 首先，糞便樣本在過夜預培養。 這些培養物被50倍稀釋到改良的標準迴腸流出物培養基（SIEM）中，以獲得約10⁹ CFU/mL的起始濃度。 所有樣品均在厭氧條件下，在37°C下，在300 rpm下搖動培養（Ladirat等，2013）。 培養基由每升4.5克NaCl、2.5克K₂HPO₄、0.45克CaCl₂·2H₂O、0.4克MgSO₄·7H₂O、0.01克FeSO7H₂O、0.4克牛膽、0.01克血紅素、0.05克果膠、0.05克木聚糖、0.05克阿拉伯半乳聚糖、0.05克支鏈澱粉、0.4克澱粉、24克蛋白胨、 24克酪蛋白和0.8毫升維生素混合物組成（Wiese等，2022）。 所有組分均從Tritium Microbiology（荷蘭Veldhoven）購買。 使用兩種溶液，即1 M MES緩衝液（Sigma Aldrich）和MOPS緩衝液（Sigma Aldrich）作為pH緩衝液。 所有實驗均在微孔板中進行。 纖維混合物以4 mg/mL的濃度添加，該劑量已顯示出明顯的微生物群調節效果，並且在人體腸道中預期的範圍內（Ladirat等，2013;Agamennone等，2023）。 單一纖維，即阿拉伯膠和KaroPro，分別以3.07 mg/mL和0.92 mg/mL的劑量添加。 選擇這些濃度以應用與臨床研究中相同的比例（分別為10克和3克）。 所有纖維均測試了三次。 厭氧發酵24小時后，取樣進行DNA分離和SCFAs分析。
gDNA提取
按照96孔高通量提取的標準操作程式，使用鋯珠擊打和PurePrep 96平臺（Molgen）從體外發酵樣品和人類糞便材料中分離基因組DNA。 簡言之，將150 μL樣品（最多250毫克糞便材料）轉移到預填充有500 μL 0.1-mm鋯珠（BioSpec，美國）的2.0-mL深孔板中。 向每個孔中加入800 μL CD1裂解緩衝液（DNeasy 96 PowerSoil Pro QIAcube HT試劑盒，Qiagen）。 每個板含有50 μL ZymoBIOMICS微生物群落標準（Zymo Research）作為內部過程控制。 將板密封並在BeadBeater 96上進行兩次2分鐘的珠擊打迴圈，迴圈之間在冰上冷卻。 機械裂解后，將板在3000 rpm下離心6分鐘，並將350 μL上清液轉移到含有每孔350 μL Agowa結合緩衝液（LGC Genomics）和10 μL Agowa磁珠的新96孔深孔板中。 混合樣品並裝載到PurePrep 96核酸純化系統（Molgen）上進行自動磁珠純化。 自動方案包括用Agowa洗滌緩衝液1和Agowa洗滌緩衝液2（各200 μL）進行順序洗滌，然後在65 μL Agowa洗脫緩衝液中洗脫。 洗脫的DNA被密封並儲存在-20°C，直到進一步處理。
擴增子測序
在基線和研究期間每4周收集糞便樣本（圖1）。 如前所述，從所有糞便樣本以及i-screen樣本中提取微生物DNA，並進行16S rRNA基因測序（Agamennone等，2023;Eveleens Maarse等，2024;Gart等，2018）。 通過使用16S rDNA擴增子測序分析微生物群組成的變化。 如Kozich等（2013）所述，使用F515/R806引物靶向V4高變區域（Caporaso等，2011）。 擴增子文庫以等摩爾量混合，並使用QIAquick凝膠提取試劑盒（QIAGEN，德國Hilden）純化。 使用Fragment Analyzer（Advanced Analytical Technologies， Inc.，德國Heidelberg）分析品質，並在Illumina MiSeq平臺（Illumina，荷蘭Eindhoven）上進行測序。 使用DADA2軟體包release 1.16（Callahan等，2016）和細菌Silva資料庫release 138.1進行序列分析。
SCFAs分析
SCFA分析如先前報導進行（Wiese等，2022）。 簡言之，糞便或體外發酵樣品儲存在-80°C，直到衍生化。 對於衍生化，將樣品稀釋在75%甲醇中，並與內標（d3-乙酸、d3-丙酸、d3-丁酸和d9-戊酸）、3-硝基苯肼（3-NPH）、1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDC）和吡啶混合。 將混合物在室溫下（600 rpm）孵育30分鐘，隨後用2%甲酸在25%甲醇中中和。 衍生化樣品儲存在-80°C，直到分析。
使用配備有加熱電噴霧電離（HESI）源的高解析度Q-Exactive Orbitrap質譜儀（Thermo Scientific，美國）和Acquity H-Class UPLC系統（Waters）進行衍生化SCFAs的定量液相色譜-質譜（LC-MS）分析。 在Acquity BEH C18柱（150×2.1 mm，1.7 μm，Waters）上實現分離。 使用校準標準和內標混合物確定SCFA濃度。 體外SCFAs濃度未校正。
統計分析
統計分析如前所述進行（Eveleens Maarse等，2024），有一些修改，特別是對於體外發酵。 使用R版本4.1.2（R Core Team 2020）進行微生物群分析，並使用ggplot2包版本3.3（Wickham和Wickham，2016）進行說明。 使用vegan包，版本2.5-7（Oksanen等，2013）執行多變數和微生物組多樣性分析。 通過置換分析擬合多變數模型，以產生模型中包含的術語的III型（邊際）p值（van den Brink等，2009），進行10³次置換。 對於多變數分析，使用累積讀數閾值去除低豐度分類群，保留一起夜色春藥網官網 夜色春藥網線上網店 夜色春藥熱銷商品推薦 關於夜色春藥網 夜色春藥網獨家資訊 夜色春藥網半價購買 夜色春藥網配送方式 夜色春藥網全部商品 夜色春藥網必買商品 夜色春藥網LINE直購 夜色春藥網折扣活動
选择95%的代表性项目（624个类别）。针对α多重性分析，结合所有权分类和基本膳食包含计算表（无需求请求）计算风味多重性。一般差异分析采用线性混合效应（LME）模型测量，α变化，定量移动效应*随时间变化的设备自动变化数量。使用emmeans hull（Lenth等人，2020）。数量多重性β多重性差异。在内部研究中，目前正在进行基本细菌16S rRNA短链脂肪酸（SCFA）的标准化工作，并考虑其对微生物的影响。由于存在外部发酵，需要培养化合物，标准化CFU密度条件，并标准化SCFA水平线。使用“lme4”Hiroyoshi混合模型。我们使用“vegan”进行非定量分析，PERMANOVA，“phyloseq”进行α多重性分析，“CCA”进行RCCA分析，以及“ggplot2”进行可视化。使用limma-voom框架（edgeR，limma）分析异质性细菌。由于voom进度log₂转换计算，ASV数量，以及记录系统过程中有意配置错误的顺序。施工前，ASV含量≥0.1%，类似产品ASV含量≥20%。每种ASV物理线模型，并行总和固定相对比例，以及国家施工技术（材料混合物、Albo水、KaroPro），共24例，实现了此前未开发的短期施工技术。打印调整，Benjamini-Hochberg FDR学校办公室。根长长后，短杆状体发生变化并出现。因此，短杆状细菌群落的差异数量非常小，以基本线标准为基准，标准差异为0.5分（SD）（Norman等，2003），因此根本差异不同，不同群落的分类也不同。这是基于Bray-Curtis差异分析（PERMANOVA）（vegan包，adonis2）和Benjamini-Hochberg差异分析，以及Wilcoxon检验的非侵入性个体微生物群落差异分析的基础。
