背景/目的：人工生物活性细胞外囊肿、外分泌和细胞通讯以及疾病机制，然而，标准的分析方法相当复杂且耗时。本报告以健康个体血浆、血清、富血小板血浆和外分泌物浓度的研究为结尾，重点关注方法学上的差异。 方法：对PubMed数据库（1986年至2025年8月31日）进行逐步全面的检索，使用“外分泌”及其定量关系术语，排除癌症疾病和相关疾病的研究。条件文本采用粒子计数技术（Runa Rice粒子追踪分析、流动池技术或可调电缺血感觉）报告血浆、血清或富血小板血浆的外分泌物浓度。 结果：22篇文献（包括167名医护人员）符合标准。报告的平均浓度范围：血浆（n=18），4.50×10^8 至 6.70×10^11 个颗粒/mL，方法差异无法识别；血清（n=10），5.30×10^8 至 2.13×10^11 个颗粒/mL；非活性富血小板血浆（n=1），7.52×10^9 个颗粒/mL；活性富血小板血浆（n=3），4.87×10^10 至 7.16×10^10 个颗粒/mL；光热生物调节富血小板血浆（n=2），2.53×10^11 至 2.99×10^11 个颗粒/mL。 结论：分离总和定量方法表现出高度异质性，对外部分泌物总量总和的质量有显著影响。在开发和验证过程中，必须考虑货物组成、纯度、完整性和其他特性。新近证据表明，光热生物调节沉积物能够增加体内细胞外分泌物的释放。推广有效的标准化方法、增进对分泌疗法的科学理解以及开展临床培训至关重要。
关键词：外分泌体；细胞外泡沫；定量；分离方法；富血小板血浆；光热生物调节
1. 引述
细胞外囊泡（EVs）是球形、弹珠状结构，大小从30到2000微米不等。多种细胞类型均可分泌EVs，EVs广泛存在于体内多种生物体中，包括血液、尿液、唾液、乳汁、导管灌洗液、脑脊液和羊水。根据大小、基底大小、来源、组成和功能，EVs可分为外分泌体、微囊泡（MVs）和死亡体。外分泌系统和正常的生物学功能与疾病过程相结合，直接促进细胞通讯、免疫反应和肿瘤扩散。
外分泌体含有生物活性物质、丰富的蛋白质、脂质和遗传信息，例如mRNA和未编辑的核酸（RNA）、丰富的microRNA（miRNA），其外层还含有外部蛋白质。生物发育和外分泌运输过程发生在多层膜融合的过程中。然而，该过程背后的分子机制尚不清楚。多种理化因素和细胞状态对外部分泌、脂多糖、肿瘤死亡率-α、氧化-γ、低温、高温、化疗药物暴露、体温控制和高温等均有影响。
1.1 外分泌临床应用
由于其良好的生物相容性、低免疫原性以及能够穿透血流障碍、外分泌系统和临床应用，该技术被广泛推荐。其主要研究领域包括再生医学、组织修复与再生（已取得显著成果）、综合癌症疾病、骨科、肺再生医学、眼科、毛发再生和精神疾病。此外，它还可用于外分泌系统性癌症、心血管疾病、既往病史、自身免疫感染的诊断和治疗，以及微损伤过程的物理表现。该技术还可用于递送特定的生物样本以调节免疫反应，并用于治疗。外分泌系统性疗法可将药物递送至特定细胞或组织，从而克服递送方法的局限性。例如，可用于探索外分泌疾病幼苗的治疗。
在获取控制权和保障服务对象生存方面，进展颇具挑战性。关键问题在于综合改进、分离和纯化方法，以及外分泌物载荷的灭菌和生物利用度问题。此外，我们目前正在开发用于外分泌和物理诊断与治疗的监管环境。
鑒於這些考慮，準確檢測和定量至關重要。 然而，其大女士催情藥 延時噴霧劑 性用品周邊 治療性冷感 淫蕩春藥水 男士催情藥 男士助勃藥 男士持久藥 補腎壯陽藥 迷昏失憶型 陰莖增大丸
小和結構的複雜性即使對黃金標準方法也構成挑戰。 分離和RNA純化技術的變異性常導致不一致數據，阻礙研究結果可比性。
1.2 外泌體分離方法
當前外泌體分離方法包括超速離心（UC）、超濾（UF）、沉澱、基於免疫親和的捕獲（IAC）和微流體技術。
超速離心（UC）：UC通過順序離心，基於大小和密度從生物樣本中分離外泌體。 初始低速旋轉去除細胞和碎片，隨後超速離心（>100,000× g）沉澱外泌體用於進一步分析。
超濾（UF）：UF使用具有定義孔徑的膜基於大小分離外泌體。 通常，較大孔徑去除碎片，而較小孔徑（50-200納米）保留外泌體並排除較小分子。
沉澱：該技術使用聚合物（如聚乙二醇）降低外泌體溶解度，誘導聚集。 在4°C下孵育后，通過低速離心收集外泌體。
基於免疫親和的捕獲（IAC）：IAC使用針對特定外泌體表面蛋白的抗體，能夠選擇性、高純度地分離細胞類型特異性亞群，包括腫瘤來源的外泌體。
微流體技術：這些方法基於大小、親和力或兩者組合分離外泌體。 基於大小的分離包括微過濾技術，使用微孔將較大顆粒與外泌體分離; 尺寸排阻色譜，通過微流體通道分離外泌體; 以及粘彈性，利用流體彈性特性分離顆粒，將較大碎片推離外泌體。
1.3 外泌體定量方法
外泌體快速高效定量的主要方法包括納米粒子追蹤分析（NTA）、流式細胞術（FCM）、可調電阻脈衝感感（TRPS）、電子顯微鏡、動態光散射（DLS）、基於微流體的檢測、表面等離子共振（SPR）和單粒子干涉反射成像感測器（SP-IRIS）。
納米粒子追蹤分析（NTA）：NTA通過追蹤鐳射照射液體樣本中外泌體的布朗運動來量化外泌體。 記錄散射光，軟體根據單個軌跡計算粒子大小和濃度。
流式細胞術（FCM）：FCM使用專門的流式細胞儀分析螢游標記的外泌體和微囊泡，實現多參數檢測和定量。
可調電阻脈衝感感（TRPS）：TRPS測量單個外泌體通過納米孔時電阻的變化，確定粒子大小、濃度和電荷。
電子顯微鏡（EM）：特別是透射電子顯微鏡提供高解析度圖像以計數單個囊泡並評估其形態。 TEM確認樣本純度和結構完整性，通常與其他技術結合使用。
動態光散射（DLS）:D LS通過用鐳射照射樣本並測量由囊泡布朗運動引起的散射光波動來量化外泌體。
基於微流體的檢測：微流體設備使用集成的晶元上分析從少量液體樣本中分離和分析外泌體。 分離可使用尺寸排阻色譜、免疫親和或介電泳進行，實現對30-150納米囊泡的選擇性檢測。
表面等離子共振（SPR）：SPR通過檢測當外泌體結合固定化抗體時折射率的變化來量化外泌體。
單粒子干涉反射成像感測器（SP-IRIS）：SP-IRIS使用帶有功能化抗體的特殊晶元從流體樣本中捕獲單個囊泡來量化外泌體。
在選擇外泌體分離或定量方法時，必須考慮成本、所需時間和每種方法的特定優缺點。 例如，某些方法可能在其計數中包括非外泌體粒子，影響結果準確性。
表1. 外泌體分離和定量技術的潛在缺點，包括獲得的粒子數量、完整性和特異性。
| 分離方法 | 缺點 |
|---|---|
| 超速離心（UC） | 高速可損傷外泌體。 UC可導致機械損傷，難以維持外泌體的生物活性和形態完整性。 |
| 超濾（UF） | 外泌體純度中等。 外泌體可能因膜損傷而丟失，損害其與靶細胞結合和通訊的能力。 |
| 沉澱 | 與非外泌體污染物（包括蛋白質和聚合材料）共同沉澱。 常見污染物包括殘留蛋白質、脂質和聚合物，可能保留生物活性，導致關於外泌體介導過程的錯誤結論。 |
| 基於免疫親和的捕獲（IAC） | IAC可能損害外泌體的功能能力。 |
| 微流體技術 | 由於生物樣本複雜性、外泌體與其他EVs的尺寸重疊以及外泌體異質性，該方法敏感性較低且分離的外泌體純度較低。 |
| 定量方法 | 缺點 |
| ——— | —— |
| 納米粒子追蹤分析（NTA） | 該方法也測量非外泌體污染物。 NTA無法區分EVs與其他粒子（如脂蛋白）。 |
| 流式細胞術（FCM） | 當樣本中較小囊泡濃度高且散射或螢光信號超過檢測限時，較小囊泡被計為單個粒子。 |
| 可調電阻脈衝感測（TRPS） | 對較小外泌體不敏感，較小囊泡被計為單個粒子。 |
| 動態光散射（DLS） | 該技術無法分析異質性外泌體群體。 |
| 表面等離子共振（SPR） | 難以區分特異性和非特異性相互作用，存在品質敏感性和感測器區域限制。 |
| 單粒子干涉反射成像感測器（SP-IRIS） | CD81的檢測限為3.94×10^9，CD63為5.07×10^9 particles/mL。 |
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了改變其產生的不同方法。 這些方法基於電刺激、藥理劑、電磁波、聲波、剪切應力、細胞饑餓、酒精、pH值、熱量和基因操作。 然而，這些策略中的許多可能改變外泌體特性和功能性，且導致這種增加的確切機制通常未知。 提高外泌體生產和生物功能對促進其臨床應用至關重要。
鑒於健康個體人類血漿、血清和富血小板血漿中外泌體濃度報告的變異性，本綜述旨在總結可用數據並突出方法學差異，這些差異突顯了標準化操作程式和準確協定的必要性。
2. 材料與方法
文獻搜索在PubMed資料庫中進行，涵蓋從1986年（人類外泌體第一篇文章發表年份）到2025年8月31日的研究。 搜索查詢包括「外泌體」或「細胞外囊泡」等關鍵詞，與「粒子」或“particles/mL”（以識別定量數據）以及「濃度」或「定量」和樣本類型描述符（“血漿”，包括富血小板血漿，或“血清”）組合。 為專注於健康供體，排除了與「癌症」或「轉移」等相關記錄。 納入標準限於來自健康供體的人類樣本數據，血漿、血清或PRP中外泌體定量，以particles/mL表示。
3. 結果
与“外分泌体”或“细胞外泡沫”相关的文章共检索到35,044篇。通过检索“血清”、“血浆”或“富血小板血浆”、“浓度”或“定量”、“颗粒”或“颗粒/毫升”以及“外分泌体”或“细胞外泡沫”等关键词，共获得126篇文章。直接在谷歌上搜索，包含三句话。经过筛选，最终对筛选出的84篇文章进行最终审核。经对原文进行深入分析，最终筛选出22篇文章，涉及约167人的健康护理，其中18篇文章涉及血浆和外分泌定量分析的第29级，4篇文章涉及血清分析的第10级，1篇文章涉及非透析分析的第1级。在动态 PRP 治疗期间，文中存在第 1 篇文章，其中第 3 篇使用了不同的动态 PRP（葡萄糖酸、血液凝固、血液凝固酶添加葡萄糖），第 2 篇使用了储存 PRP（蓝光 467 输送，1.0 J/cm²，37°C；2.0 J/cm²，37°C）。
血浆外分泌物平均浓度范围为4.50×10⁸至6.70×10¹¹个颗粒/mL。采用分层分配法，FCM的平均浓度范围为3.50×10⁶至1.50×10¹⁰个颗粒/mL，NTA为4.50×10⁸至6.70×10¹¹个颗粒/mL，TRPS为9.05×10⁸至4.36×10¹⁰个颗粒/mL。NTA经血清排出后的平均外分泌物浓度范围为5.30×10⁸至2.13×10¹¹个颗粒/mL。外分泌体中非活性PRP的平均浓度为7.52×10⁹个颗粒/mL。 PRP（综合占有法）外分泌的平均范围为 4.87×10^10 至 7.16×10^10 个颗粒/mL，储存 PRP 为 2.53×10^11 至 2.99×10^11 个颗粒/mL；平均通过 NTA 进展。
