引述
本文介绍了一种基于外用微泡(EVs)的新型抗衰老护肤方法,这些微泡来源于人体血液。研究结果如下:
目的
进一步研究细节:皮内注射、长时间血液中和、外部泡沫保留 3 个周期、多种类型的皮肤注射、地板效应、表面减少、细小皱纹、高皮肤密度、水分含量、折叠能力、黄色、光强度、质地和毛孔大小。
方法
我们接收了25名患者(年龄40-59岁),他们在注射部位附近采集了血液样本,并在细胞外发现了泡沫。分别在治疗前、治疗后、治疗后5天和治疗后3周采集了血液样本。
结果
5天前,经过3个周期的常规观察,计算了皱纹深度、皮肤纹理、含水量和功能障碍情况,平均面积均有所改善(p < 0.05)。研究期间,肤色、色斑、毛孔大小和毛孔粗度均显著改善。结果经工作人员确认,参与率高。研究期间未报告任何失败或安全问题。
结论
这项研究清楚地证明了衰老过程中存在的天然血液来源、细胞外泡沫的有效性和安全性,以及非侵入性美容治疗的合法有效性。
第一条引文
皮肤老化是一个涉及内外因素的多方面生物学过程。内在因素、自然衰老过程、紫外线 (UV) 辐射、环境因素、生活方式选择以及其他外在因素都会加速城市地区的皮肤老化 [1]。微观层面的影响包括皮肤完整性下降、皮肤蛋白质水平降低、皮肤功能丧失、经皮水分流失 (TEWL) 增加以及皱纹的出现 [2,3]。在日本,存在多种医疗治疗方法,例如外用合成酸、强光治疗和皮肤填充,以及针对人体微损伤的自然修复、生物学效应和有效抗衰老策略的需求 [4]。
再生医学的最新进展催生了细胞外囊泡(EVs)的出现,其在皮肤及皮肤疾病的治疗中具有特殊意义[5]。EVs(30-150 nm)能够穿透生物活性分子(包括蛋白质、脂质和微RNA (miRNA)),从而促进细胞通讯[6,7]。EVs可由多种细胞(如形态细胞、成体细胞、间充质干细胞和血小板)分泌,参与组织再生、免疫调节和细胞外基质(ECM)形成,并具有重要的可塑性作用[8,9]。
细胞外囊泡(EVs)刺激细胞生长、增加蛋白质合成、减少脱水和促进口腔脱水的能力是皮肤病学领域最先进的方法之一[10]。先前的研究表明,间充质干细胞(MSCs)和EVs来源于血小板,能够促进真皮再生,减少衰老迹象,并参与衰老的分泌机制[11-13]。然而,考虑到EVs的同源性和不同来源的治疗免疫原性,以及行政环境的变化、研究方法和其他研究资源的可能性,以及研究人员的培养[ 14 ] 。
源自血液的细胞外囊泡(EVs)具有独特的优势。通过使用患者自身的生物材料,可以避免使用患者自身的生物材料,同时彻底清除免疫系统和病原体,并保持高度的生物相容性治疗效果[15]。在皮肤病理学领域,血液来源细胞的研究范围有限,目前已有初步研究成果,其能够全面滋润肌肤、改善肌肤水分并减少皱纹的形成[13]。我们已对其有效性和安全性进行了高质量、详细的研究和全面评估。
最近的皮膚病學研究進展日益認識到EVs作為皮膚再生和抗衰老治療的有希望介質。 研究表明,來自間充質幹細胞、成纖維細胞甚至植物的EVs可以促進成纖維細胞增殖、增強膠原蛋白合成,並減少光老化皮膚中的氧化應激[16-18]。 當代綜述進一步指出,化妝品皮膚病學中的外泌體干預仍處於早期臨床階段,但在增強皮膚彈性、水合和屏障修復方面顯示出顯著潛力[19,20]。 這些發現強調了在專注於皮膚年輕化的臨床環境中評估自體血液來源EVs製劑的生物學原理。
本研究的目的是評估單次皮內注射自體血液來源EVs在三周期間增強皮膚再生的效果。 此外,本研究還評估了建立治療的安全性概況,為將自體EVs治療方法整合到皮膚病學實踐中提供必要的臨床證據。
2 材料和方法
2.1 研究設計
本單中心、前瞻性臨床研究在獨立臨床研究機構進行。 研究方案和知情同意檔經機構審查委員會(IRB No. GIRB-24N07-HG)審查批准,符合赫爾辛基宣言(1964)及其後續修正案的倫理原則。
共招募了25名健康成人(11名40多歲和14名50多歲; 18名女性和7名男性; 平均±標準差=49.6±3.3歲)。 納入標準包括40-59歲成年人,表現為輕度至中度面部光老化和可見皺紋,Fitzpatrick皮膚類型II-IV,以及願意在研究期間避免其他美容程式。 排除標準包括懷孕或哺乳、對研究材料的已知過敏、活動性皮膚病或全身性疾病、抗凝劑使用、肥厚性疤痕或瘢痕疙瘩病史,以及在過去3個月內參與其他臨床試驗。 每位參與者接受了單次皮內注射自體EVs製劑,使用33G針頭均勻分佈在全臉區域的中至深層真皮層。
臨床評估在基線(第0天)、第5天和第3周在受控環境條件(溫度20°C-24°C,相對濕度45%-55%)下進行,經過30分鐘適應期后。 所有參與者在入組前提供了書面知情同意。
2.2 自體血液來源EVs製備
自體血液來源的EVs從當天採集和處理的外周血樣本中分離。 全血以3500 rpm離心10分鐘獲得血漿,然後以10 000 × g再次離心10分鐘以去除剩餘的細胞碎片。 使用35 nm qEV1柱(Izon Science Ltd., New Zealand)通過尺寸排阻色譜法(SEC)從2 mL血漿中純化EVs組分。 在載入血漿前,用27 mL無菌生理鹽水平衡柱子以去除儲存防腐劑並穩定基質。
丟棄前4.7 mL洗脫液,收集隨後的2.8 mL含有EVs富集組分的洗脫液。 使用納米顆粒跟蹤分析(NTA, NanoSight PRO, Malvern Panalytical, UK)確定顆粒濃度和尺寸分佈。 回收顆粒的模態直徑約為90 nm,屬於根據細胞外囊泡研究最低資訊(MISEV)指南報告的小EVs典型尺寸範圍(30-150 nm)[21]。
基於SEC的分離和NTA分析證實了小EVs的成功富集,同時最大限度地減少了可溶性血漿蛋白的污染,提供了標準化和可重複的自體EVs來源,適用於皮內應用。
2.3 皺紋、皮膚提升、紋理和毛孔參數評估
所有參與者在測量前在受控環境條件(20°C-24°C溫度和45%-55%相對濕度)下適應30分鐘。 使用Antera 3D CS系統(Miravex Ltd., Dublin, Ireland)分析眼周和鼻唇溝區域的皺紋深度、表面粗糙度和毛孔形態,該系統採用多方向LED照明和多光譜3D重建生成高解析度表面拓撲圖。
使用皺紋分析模式確定眼周和鼻唇溝區域的皺紋深度和皺紋體積,而整體提升效果則通過基於皮膚表面位移的體積提升指數進行量化。 表面紋理由算術平均粗糙度值(Ra,以微米表示)表徵,毛孔形態被量化為總毛孔面積(mm2)和平均毛孔體積(mm3)。 每個區域測量三次,使用平均值進行分析。 皺紋深度、Ra和毛孔面積的減少以及提升指數的增加被解釋為皮膚表面平滑度和緊致度的改善。
2.4 皮膚彈性、水合和屏障功能評估
在適應30分鐘后的20°C-24°C和45%-55%相對濕度條件下,使用標準化設備(Courage + Khazaka Electronic GmbH, Cologne, Germany)測量臉頰區域的皮膚生物力學和屏障參數。
使用2 mm探針和450 mbar負壓的Cutometer Dual MPA 580評估皮膚彈性。 每次測量包括三個吸放迴圈(各1秒),自動計算彈性參數R2 (Ur/Ue)以表示總皮膚彈性,R2值越高表示彈性越大。 使用Corneometer CM 825評估皮膚水合,該儀器測量角質層的電容,三次讀數的平均值以任意單位(AU)表示。 使用TewameterTM 300通過開室探針測量經皮水分流失(TEWL),每次測量持續25秒,最後3秒的平均值以g/m2 h表示。 在雙側臉頰上進行重複測量,使用平均值進行分析。
2.5 皮膚色調和光澤評估
使用配備佳能EOS 5D數碼相機和六濾光輪照明的Visia-CR成像系統(Canfield Scientific Inc., Fairfield, NJ, USA)分析皮膚色調和光澤。 在兩個預定義的成像模式下獲取標準化照片,以確保各時間點之間具有可比性。
在Standard2模式下,通過計算CIELAB色彩空間中的L-值(亮度)來量化整體皮膚亮度,該值客觀表示皮膚亮度。 在平行偏振模式下,基於偏振光反射分析確定表面光澤強度,提供皮膚亮度和光澤的指數。 所有圖像數據使用I-Max plus軟體(ING PLUS Co., Korea)處理,在每個時間點(基線、治療后第5天和第3周)保持相同的照明和相機定位。 L-值和光澤強度的增加被解釋為皮膚色調和整體亮度的增強。
2.6 安全性和不良事件評估
基於研究期間確定的不良事件(AEs)對所有參與者的安全性進行評估。 記錄治療后發生的以及隨訪期間自發出現的所有與測試程式相關的AEs。 在每次就診時(基線、治療后5天和治療后3周),皮膚科醫生評估注射部位並記錄任何局部反應,如紅斑、水腫、壓痛、硬結或瘙癢。 還詢問參與者在觀察期間出現的任何全身癥狀。 使用所有報告的事件計算AEs的總體發生率,結果用作產品安全性評估的參考數據。 未報告重大或嚴重AEs,且沒有參與者因治療相關反應而退出研究。 因此,自體血液來源的EVs製劑在本研究中被認為適用於臨床使用。
2.7 皮膚密度測量
使用Skin Scanner (TPM, Germany)評估皮膚密度。 該儀器使用22 MHz超聲換能器產生短電脈衝以創建密度圖像並提取定量數據。 分析表皮和真皮密度值(%),這些綜合密度值(表皮+真皮)的增加表明皮膚緊湊度的改善。 在三個時間點進行測量:治療前、治療后5天和治療后3周。 所有掃描均在研究方案規定的受控溫度(20°C-24°C)和濕度(45%-55%)條件下進行30分鐘適應期後進行。
2.8 主觀自我評估評估
為評估自體血液來源細胞外囊泡(EV)治療后的參與者報告結果,根據批准的臨床方案(GMEA-MT-24074)進行了結構化自我評估問卷。
25名參與者在兩個治療后時間點——治療后第5天和第3周完成了調查。 問卷包括11個專案,用於評估皺紋外觀、皮膚緊致度、水合、屏障功能、皮膚色調、光澤、紋理、毛孔細化、彈性和整體皮膚狀況的感知改善。 每個專案按五點李克特量表評分,範圍從“非常同意(5)”到“非常不同意(1)”,如臨床報告中所定義。 將3分或更高的回應(「中立」、」同意「或」非常同意」)歸類為積極回應,並計算每個參數在兩個評估時間點的積極評分百分比。 參與者在標準化條件下獨立完成問卷,以盡量減少回應偏差。 自我評估表中提到的任何治療相關不適或不良反應均在同次就診時由研究者審查和驗證。 為展示目的,選擇了五個代表性參數——皺紋、彈性、水合、色調和毛孔外觀——以可視化結果部分中主觀改善的整體趨勢。
2.9 統計分析
所有統計分析均使用IBM SPSS Statistics 27.0版(IBM Corp., USA)進行。 在推斷性檢驗之前,使用Shapiro-Wilk檢驗評估數據分佈的正態性。 對於滿足正態性假設的數據集,應用重複測量方差分析(ANOVA)比較三個時間點(基線、治療后5天和治療后3周)的值。 通過Mauchly檢驗驗證球形假設,當假設不滿足時,解釋多變數檢驗中的Wilks’ lambda。 使用受試者內對比分析檢查時間點之間的差異。 如果正態性假設不滿足,則使用非參數Friedman檢驗。 然後使用Wilcoxon符號秩檢驗進行成對比較,並使用Bonferroni校正對多重比較進行顯著性水平調整。
所有分析採用雙側顯著性閾值p < 0.05。 當通過重複測量ANOVA分析時,統計顯著性表示為**p < 0.05,當通過Wilcoxon符號秩檢驗分析時,表示為*#*p < 0.05,與原始臨床報告一致。
3 結果
3.1 皺紋深度減少和皮膚緊致度改善
三維成像顯示,隨著時間的推移,眼周和鼻唇溝皺紋減少以及皮膚提升效果得到改善。 如圖1A所示,治療後面周皺紋明顯減少。 定量分析證實,3周後眼周皺紋深度減少了19.05%(圖1B)。 同樣,與基線相比,鼻唇溝皺紋減少了19.68%(圖1B)。 提升效果在眼周和鼻唇溝區域也顯而易見。 如圖1A所示,治療後觀察到皮膚緊致度明顯增強。 相應分析顯示,3周時眼周提升體積減少了17.55%,鼻唇溝提升體積減少了29.38%(圖1B),表明結構支撐和皮膚彈性得到改善。
圖1 三維(3D)成像和定量分析,顯示治療前、治療后5天和治療后3周的眼周和鼻唇溝皺紋深度及提升效果。 (A)代表性3D圖像,顯示不同時間點的眼周皺紋和提升,以及鼻唇溝皺紋和提升。 (B)基於25名臨床試驗參與者數據的眼周皺紋和提升以及鼻唇溝皺紋和提升的定量分析。 數據表示為平均值±標準差。 統計顯著性由*#p* < 0.05表示,使用Wilcoxon符號秩檢驗分析。
3.2 皮膚水合、屏障功能、光澤和彈性的增強
皮膚水合評估顯示,EV治療後水合水平顯著提高。 如圖2A所示,與基線相比,5天時水合水準提高了22.65%,3周時提高了34.52%。 此外,TEWL分析表明,5天時減少了16.17%,3周時減少了25.85%,表明皮膚屏障功能得到增強(圖2B)。 這些發現表明,EV治療有效改善了皮膚水合和屏障完整性。
圖2 25名參與者的皮膚臨床評估結果,包括治療前、治療后5天和治療后3周。 (A)顯示隨時間變化的皮膚水合變化圖。 (B)經皮水分流失(TEWL)測量,表明皮膚屏障功能的改善。 (C)皮膚光澤強度的定量分析。 (D, E)代表性面部圖像和相應圖表,顯示皮膚色調(L-值)的變化。 (F)顯示不同時間點皮膚彈性(R2)分析的圖表。 數據表示為平均值±標準差。 統計顯著性由重複測量ANOVA分析的p < 0.05和Wilcoxon符號秩檢驗的 #p < 0.05表示。
對皮膚光澤和色調的評估進一步證實了治療的益處。 如圖2C所示,光澤強度隨時間顯著增加,反映了更明亮的膚色。 同樣,圖2D顯示皮膚色調得到增強,治療后5天和3周觀察到顯著改善。 這些變化表明,EV應用有助於產生明顯更健康、更明亮的外觀。
使用R2參數測量的皮膚彈性也表現出顯著改善。 如圖2E所示,彈性在5天時提高了17.81%,在3周時提高了29.76%,表明皮膚緊致度和彈性逐漸增強。
3.3 皮膚紋理增強、毛孔減少和真皮密度增加
三維成像顯示,EV治療后皮膚紋理和毛孔細化逐漸改善。 如圖3A所示,隨著時間的推移,皮膚表面明顯變得更加光滑,粗糙度降低,均勻性提高。 定量分析顯示,治療后3周,皮膚粗糙度(Ra)減少了17.11%(圖3B),證實了皮膚紋理的顯著改善。
圖3 皮膚紋理、毛孔和皮膚密度隨時間變化的三維成像和定量評估。 (A)代表性3D圖像,顯示治療前、治療后5天和治療后3周的皮膚紋理和毛孔結構變化。 (B)25名臨床試驗參與者的皮膚紋理粗糙度(Ra)、毛孔面積和毛孔體積的定量分析,顯示隨時間推移的漸進改善。 (C)基於超聲的橫截面圖像,顯示治療前後皮膚結構和密度的變化。 (D)臨床試驗參與者測量的皮膚密度(%)的定量箱線圖分析,表明隨時間密度增加。 數據表示為平均值±標準差。 統計顯著性由*#p* < 0.05表示,使用Wilcoxon符號秩檢驗分析。
除了紋理細化外,還評估了毛孔特徵。 結果表明毛孔尺寸和體積顯著下降,5天時毛孔面積減少了32.35%,3周時進一步減少到46.80%。 同樣,毛孔體積在5天時減少了36.16%,3周時減少了50.62%(圖3B)。 這些發現表明,EV治療有效縮小毛孔尺寸,有助於改善皮膚外觀。
為進一步研究皮膚結構變化,使用基於超聲的成像評估皮膚密度。 如圖3C所示,治療后橫截面圖像顯示真皮密度增加。 定量分析證實,3周時皮膚密度增加了10.43%(圖3D),表明治療促進了真皮完整性和結構強化。
3.4 基於主觀自我評估的持續皮膚改善
通過結構化自我評估調查評估的參與者報告結果表明,自體血液來源EVs給葯后,多個皮膚參數的感知改善呈漸進趨勢。 如圖4所 香港龍城大藥房全部商品 香港龍城大藥房必買商品 香港龍城中西大藥房 香港龍城藥房線上訂購 香港龍城暢銷商品 關於香港龍城大藥房 香港龍城大藥房獨家資訊 香港龍城大藥房折扣 香港龍城大藥房配送方式
示,關於皺紋減少、皮膚彈性、水合、皮膚色調和毛孔細化的反應從治療后5天到治療后3周呈上升趨勢,表明治療效果持續。
经过4 天的治疗、5天(5D)和3周(3W)后对绱纹缩小、傤傤弹性、水悦浦性、肤色匌匏程度,毛孔变小,自我的进步完成了。显示五点清单(强烈不同意、不同意、中立、同意、强烈同意),并随着时间的推移进行更改。
经过三轮观察,同意或非常同意的参与者人数增加。皱纹减少,随着时间的推移,皮肤状况有所改善,治疗后5天、3周后报告显示,逆转率有所提高。同时,皮肤弹性明显改善,真皮紧致度和完整性得到提升。3周内皮肤含水量有所提高,皮肤的保湿能力和有效性也得到改善。肤色更加均匀,毛孔外观改善,血液循环改善,皮肤更加光滑细腻。除了改善皮肤光滑度外,皮肤的有效性以及物理卫生方面也略有改善(具体数字未列出)。共同声明,治疗人血细胞外囊肿的能力能够立即改善皮肤状况,治疗后3轮内,皮肤质量持续改善。