外分泌体是一种具有分泌级细胞外囊（30-150个细胞）的细胞类型，其内部含有蛋白质、脂质、核酸（mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、DNA）、代谢物和其他多种物质，在细胞间通讯中发挥着关键作用。利用其生物活性分子的生物活性，可以创造出一种新型生物样本，用于以高度自然的方式治疗人体。人类和动物来源的外分泌体（例如，我们自身的间充质干细胞、免疫细胞、乳汁）的成因和治疗方法已被广泛研究，但植物来源的外分泌颗粒（PDENs）已成功应用。PDENs具有独特的优势，例如全面的灵活性、相对较低的免疫原性、易于培养以及植物固有的生物活性，并且可能含有独特的治疗化合物。然而，对植物、动物、人类和其他生物体之间，以及人类与其他生物体之间进行全面和统计学上的比较极其困难。在本比较分析中，菌株鉴定和特异性治疗最重要的外分泌来源是容量、货物组成、纯度、毒力和有效性等重要因素。本研究旨在对具有代表性的植物、动物和人类来源的外分泌物及其在人体内的代谢过程进行多方面的统计分析，填补知识空白，最终目标是确定未来治疗研发的“最佳”标准。
1. 研究问题
- 不同的植物、动物、人类起源、外分泌体力、大小、纯度、存在方式、数量和质量上的差异？
- 外分泌蛋白结构、蛋白质结构（miRNA、mRNA）和脂质结构的起源有哪些显著差异？
- 某种特定的外分泌货物分子（例如特定的miRNA或蛋白质）是否确实存在于某种生物的外分泌体中？实践能力的预言有何意义？
- 在外部模型中，选定的植物、动物和人类都具有外分泌免疫调节、再生和抗炎能力，并且存在一些功能上的细微差异？
- 基于分离数量、货物特性和功能测量综合统计分析，最适合表达来源的处理方法是什么？
2. 目标
- 目标 1：标准化、改进和代表性的植物、动物和人类来源，分离和讨论外部分泌物，并确保高纯度和后续分析。
- 目标 2：对每种物种分离的外分泌组织进展进行全面的多系统分析（蛋白质化学、蛋白质化学、脂质化学）。
- 目标 3：综合统计分析，比较和同质外分泌特征（体积、大小、纯度）和货物特征（蛋白质、RNA、脂质差异）。
- 目标 4：对现有治疗和外分泌功能（细胞清除、抗炎作用、促进再生）的相关外部模型进行全面评估。
- 目标 5：多维统计构建、一致发展、识别和推荐针对特定治疗目的的最佳外部分泌来源。
3. 方法
3.1 外分泌源的选择：
- 植物来源：选择 1-2 种具有已知治疗特性和代表性植物来源的植物（例如开花植物、葡萄或特定牲畜的植物）。
- 动物来源：选择 1-2 种具有代表性的动物来源（例如牛奶或动物来源间充质干细胞——ADSCs）。
- 人类的起源：选择 1-2 个代表人类起源的物种（例如人类脐带组织干细胞—hUCMSCs 或人乳）。
- 对人类和动物而言，有符合人类和动物标准的伦理要求，并且必须得到批准。
3.2 外分泌分离（目标 1）：
- 分离方法：采用联合认证方法保证纯度和数量，速度超快，偏心率低至100 % ，低至 100% ，低至100% 。
延长射精 时间， 延长射精时间，延长射精时间，延长射精时间，延长射精时间，延长射精时间，延长性交时间，改善性功能，改善勃起功能，改善勃起功能。
排除色度评分（SEC）总和/免疫亲和捕获。对不同分离方法进行比较分析，从先前的方法中选择每种物种的最佳组合。
- 桌子：
- 维度总浓度：使用 ZetaView 或 Nanosight 高级粒子跟踪分析 (NTA)。
- 形式：透射电子显微镜（TEM）。
- 纯度：标准外分泌标本（CD9、CD63、CD81、TSG101），日本细胞染色阴性标本（如GM130所示用于高等级体，Calnexin用于内部组织）蛋白质印迹。
- Zeta电位：表面电荷总和的评估。
3.3 多组分析（目标 2）：
- 蛋白质化学：液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）外分泌体蛋白质的全面鉴定和定量。
- 统计组学(RNA 统计组学):
- 小RNA测序：针状微RNA（miRNA）、piRNA和其他小的非编辑RNA。
- mRNA-seq/lncRNA-seq：针库 RNA Kazucho 鏈非编辑 RNA。
- 脂质化学：LC-MS/MS 外分泌体脂质的详细分析。
3.4 统计分析（目标 3）：
- 号码存储：自有群组、号码集合、质量控制、审核、校对。
- 差异分析：t 检验、方差分析、非实验分析等。有效识别不同外分泌体特征（体积、大小）和单个货物分子（蛋白质、RNA、脂质）的方法。
- 变异分析：
- 主成分分析（PCA）/层结构：基于分子特征和外部分泌物鉴定的组合，自然划分求和模型。
- 偏最小二乘判别分析（PLS-DA）：从同一来源中区分最具判别性的分子特征。
- 差异分析：使用特定的生物学研究方法（如 DESeq2、edgeR 用于 RNA-seq 数量分析；Perseus 用于蛋白质化学分析）来识别货物分子的差异。
- 通道和功能财富收集分析：身体基本原因理论（GO）、KEGG通道分析和miRNA关键预测预测推断以及非同源外分泌身体和财富收集的生物学功能和通道。
- 相关性分析：研究外分泌特征、货物组成和功能结果之间的关系。
3.5 功能性绩效评估（目标 4）：
- 细胞采集研究：比较受体细胞（Rusei纤维细胞、免疫细胞、内部皮肤细胞）与通过身体的外分泌细胞，重点关注显微日式细胞采集技术，以及体外采集的效率。
- 免疫调节测量：免疫细胞（如巨细胞、T 细胞）共培养，评估不同外分泌细胞的分泌（ELISA 测量 IL-6、TNF-α、IL-10）以及免疫细胞增殖/分化效应。
- 加速再生测量：外部创伤、细胞转变的实际测量、管状形成、血管生成的实际测量以及相关细胞系统的中间活力/再生能力的提高。
3.6 关于协调和统一的建议（目标 5）：
- 将表达、组织分析、功能测量、拥有统计发展进度对齐。
- 发展评价、能力、纯度、特定治疗财富收集、体外功能有效性等预计会很重要。
- 采用多准则决策分析或类似统计框架，根据其不同的治疗用途和物理适用性，比较和排除外部身体来源。
4. 存款结果的意义
这项研究的重要成果：
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- 综合分子图谱：即将到来的不均匀世界的外分泌货物的详细分子蓝图，以及独特的分子特征列表。
- 统计比较：有强有力的统计证据表明，植物、动物、人类来源和外分泌物之间存在数量、质量和差异。
- 确定“最佳”来源：基本循环标准明确推荐针对特定治疗最有效的外部分泌来源。
- 新的生物学里程碑/治疗点：开发了一种具有治疗潜力的新型外分泌货物分子。
- 未来研究指导：内科研究和临床实践的基础。
本研究迫切需要对外部分泌系统进行系统性的统计数据汇总和比较，作者旨在推动外部分泌生物学和治疗领域的发展，为安全、有效、灵活的外分泌疗法开发提供关键决策依据，并最终支持改善患者护理。
