目前，髋关节癌是全球癌症死亡的主要原因之一，对安全有效、疗效显著且治疗强度高的治疗方法的需求日益增长。Qu-SeNPs等材料具有优异的性能，未来可应用于多种治疗方法，并已取得良好效果。本研究比较了Qu-SeNPs对HCT116细胞的抗癌能力，并证实了Qu-SeNPs（CP）在直接治疗中的应用。研究结果充分阐明了Qu-SeNPs和CP在癌细胞中的作用机制。通过紫外光照射、傅里叶变换红外光谱（FTIR，透射镜）、透射电镜（TEM）等方法，Qu-SeNPs在410 nm处有吸收峰。MTT实验结果表明，Qu-SeNPs（IC50 = 17.6 μg/mL）对HCT116细胞具有剂量依赖性的抑制作用，其IC50值为51.19 μg/mL。物理分析证实了 Qu-SeNPs 的物理性质差异及其对活性抑制作用。结果表明，Qu-SeNPs 在中性酸性条件下能够均匀快速释放，且其释放速率与慢沸模型 pH 再生速率相符。ROS 活性分析显示，引入 Qu-SeNPs 6 年后，ROS 活性迅速增加，并在 24 至 48 年达到峰值；48 年后，ROS 活性保持稳定。细胞周期分析表明，Qu-SeNPs 能够抑制细胞周期、S 期和 G2/M 期，其作用机制可控，并可修饰细胞 DNA。彗星死亡后，其 DNA 发生了改变。Western blot 分析显示，Nrf-2 具有抗炎活性，Qu-SeNPs 也表现出 Nrf-2 抗炎活性和 ROS 特异性抗炎活性。Qu-SeNPs 能够促进 ROS 清除并同时抑制 Nrf-2，为治疗提供了一种有效的策略。然而，我们已经证实 Qu-SeNPs 在体外具有抗癌作用，但体外研究尚未证实其疗效和安全性。
引述
癌症是全球最严峻的健康挑战，也是全球大规模死亡和高死亡率的重要原因。在常见癌症类型中，结直肠癌（CRC）是第三大常见癌症，也是全球癌症死亡的主要原因。国家食品药品监督管理局（FDA）已批准300种化学药物用于治疗腹部癌症，而癌症治疗效果有限公司是腹部癌症治疗的中心。目前，常用化学药物的耐受性高、特异性低、皮内注射效果不均匀、毒性问题严重、主要作用于局部，且患者出院后疗效下降。因此，开发一种高效、低毒、高需求的治疗方法至关重要。本文探讨了区域技术进展、现有生物学研究成果、突破性性能、生物利用度和释放性能以及新的癌症治疗策略。它是专门研发的，最近作为一种新型抗癌成分（红米，实心米粒）出现，具有很强的抗炎和抗血小板特性。
順鉑（CP）是一種廣泛用於各種實體瘤（包括CRC）的鉑類化療藥物。 它通過形成DNA加合物發揮抗癌作用，導致DNA交聯、複製抑制和癌細胞凋亡，通過各種信號通路進行調控。 此外，CP與蛋白質和酶相互作用，可能改變其生化功能。 然而，CP的細胞毒性和凋亡活性不僅限於癌細胞，通常會對正常細胞造成不良影響，限制了其治療視窗並降低了患者依從性。 儘管CP已證明有效，但包括CP在內的鉑類抗癌藥物會因DNA修復增強、藥物轉運改變、解毒過程增強以及生存途徑啟動等因素而產生耐藥性，這對有效治療構成了重大挑戰。 鑒於這些限制，大量研究集中在尋找CP更安全、更有效的替代品上。 其中，天然化合物及其衍生物因其副作用最小且作用機制多靶點而受到廣泛關注。喚醒慾望女士催情 一夜傾心迷幻藥 再次悸動治療性冷感 堅持到底男士持久 快速起效男士助勃 掌控時間延時噴霧 淫蕩春藥水 自然加碼陰莖增大 草本配方補腎壯陽 點燃欲火男士催情
槲皮素是一種天然存在的膳食黃酮類化合物，通過調節參與凋亡誘導、細胞週期阻滯、增殖抑制和氧化應激調節的關鍵細胞通路，表現出抗氧化、抗炎和抗癌特性。 此外，槲皮素可以增加癌細胞對標準化療藥物的敏感性，提高其有效性和最小化相關毒性。 Maurya等人報導，槲皮素通過調節PI3K/AKT通路抑制HCT116細胞的生長並促進凋亡。 同時，Pratheeshkumar等人的研究結果表明，槲皮素通過靶向VEGF-R2調控的AKT/mTOR/P70S6K信號通路抑制腫瘤生長和血管生成。 硒納米顆粒（SeNPs）與其他金屬納米顆粒（如銀和金）相比成本效益更高，並且由於其治療潛力，作為抗癌藥物和植物生物活性化合物的載體而受到關注。
硒納米顆粒（SeNPs）因其高表面積與體積比、可控尺寸以及與癌細胞的選擇性相互作用，已成為癌症治療的有前景平臺。 它們主要通過產生ROS、誘導DNA損傷和觸發癌細胞凋亡來表現出抗癌活性。 此外，SeNPs對癌細胞表現出選擇性細胞毒性，主要通過誘導凋亡和抑制腫瘤生長通路。 從香菇多糖合成的SeNPs在結腸癌細胞中表現出細胞週期阻滯和線粒體介導的凋亡。 然而，儘管有這些有希望的發現，據我們所知，尚未有研究報導比較Qu-SeNPs與CP在結直腸癌中細胞毒性劑量下的抗癌功效。
抗癌劑的體外評價需要臨床相關細胞模型。 HCT116是一種被廣泛研究的人結腸癌（CRC）細胞系，用於研究CRC進展、分子機制和治療反應。 它密切反映了人類CRC腫瘤的關鍵特徵，包括侵襲性生長、侵襲、轉移和常見CRC相關突變，使其成為臨床相關模型。 由於其明確的遺傳和表型特徵，HCT116作為評估藥物功效、耐葯機制和凋亡的穩健平臺，支援新型CRC療法的臨床前開發。
儘管槲皮素具有明確記錄的抗氧化和抗癌特性，但它存在幾個主要缺點，包括水溶性極差、腸道吸收有限、快速代謝和口服生物利用度低。 這些限制顯著限制了其治療效用和一致的系統暴露。 將槲皮素與SeNPs進行納米製劑提供了一種有前景的策略，通過改善其穩定性、生物利用度和靶向遞送到腫瘤組織來克服槲皮素的局限性，從而增強治療效果。 基於這一理論，我們假設槲皮素負載的SeNPs（Qu-SeNPs）將對CRC表現出強大的抗癌活性。 因此，本研究旨在合成和表徵Qu-SeNPs，並評估其在HCT116 CRC細胞中的細胞毒性功效和潛在分子機制，以CP作為參考化療藥物。 據我們所知，這是首次比較Qu-SeNPs與CP在HCT116細胞中的抗癌潛力的研究，為納米載體方法解決傳統化療的一些局限性提供了初步見解，並有助於開發更安全、更有效的CRC療法。
材料與方法
試劑和材料
聚乙烯醇（PVA，99.5%）和抗壞血酸（99.5%）購自Santa Cruz Biotechnology（CA，美國）。 甲醇（≥99.99%）、聚乙二醇（PEG，99.99%）、亞硒酸鈉（99.99%）和槲皮素（≥95%）購自Sigma-Aldrich（MO，美國）。 順鉑購自Santa Cruz Biotechnology，CA，美國。 本研究中使用的所有化學品均為分析級，購自Sigma-Aldrich（MO，美國）。
納米顆粒的合成
Qu-SeNPs通過槲皮素還原亞硒酸鈉合成，槲皮素同時充當還原劑和封端劑。 聚乙二醇（PEG）被用作穩定劑，遵循先前建立的方案並稍作修改。 所有程式均在無菌層流罩內無菌條件下進行。 具體而言，將100 mL亞硒酸鈉水溶液（5.78 mM）與100 mL槲皮素甲醇溶液（16.5 mM）混合。 槲皮素溶液使用0.20 μm濾器滅菌。 使用移液管將亞硒酸鈉溶液逐滴加入槲皮素溶液中。 然後將聚乙二醇（2.0 mM）溶解在混合物中，使用磁力攪拌器在70°C下攪拌。 將形成的納米顆粒在黑暗中放置5小時，顏色從黃色變為深棕色表明Qu-SeNPs的形成。 然後將形成的納米顆粒在40°C的無菌培養皿中乾燥。
合成納米顆粒的表徵
合成的納米顆粒通過多種先進的分析方法進行了全面表徵。 使用Lambda-25分光光度計（PerkinElmer，馬薩諸塞州沃爾瑟姆）在200-800 nm的光譜範圍內進行紫外-可見（UV-Vis）光譜分析。 特別關注200-300 nm區域的吸收特徵，該區域中明顯吸收峰的出現是成功合成硒納米顆粒的關鍵指標，為瞭解其光學特性提供了重要見解。 使用Zetasizer Ultra（Malvern Panalytical Ltd.，英國伍斯特郡）進行動態光散射（DLS）和zeta電位測量，分析粒徑分佈和表面電荷。 使用Spectrum 100 FTIR光譜儀（PerkinElmer，馬薩諸塞州沃爾瑟姆）進行傅里葉變換紅外光譜（FTIR）分析，以確定官能團並確認槲皮素包被的分子相互作用。 使用D8 Advance衍射儀（Bruker AXS GmbH，德國卡爾斯魯厄）進行X射線衍射（XRD）分析，確定晶體結構。 使用JSM-7610F場發射SEM（JEOL Ltd.，日本東京）在20 kV下進行掃描電子顯微鏡（SEM）和能量色散X射線光譜（EDAX）分析，檢查表面形態和元素組成。 使用JEM-1400Plus TEM（JEOL Ltd.，日本東京）進行透射電子顯微鏡（TEM）分析，獲得納米顆粒形態的高解析度圖像（200-1,200,000×）。
藥物釋放動力學
使用透析袋技術，在生理（pH 7.4）和腫瘤類比（pH 5.5）條件下評估Qu-SeNPs與順鉑的藥物釋放動力學，如Yu等人所述。 凍乾的Qu-SeNPs在0.1 M磷酸鹽緩衝鹽水（PBS，pH 7.4）中重新配製，同時平行製備相同濃度的順鉑。 將這些製劑的等體積轉移到預水合透析膜（MWCO 12 kDa）中，並浸入含有0.1% Tween 80的20 mL PBS（pH 7.4或5.5）中。 將整個系統在37°C下孵育，以100 rpm連續搖動。 在72小時內的特定時間間隔，取出1 mL樣品並補充新鮮緩衝液以維持漏槽條件。 收集的樣品在5000 rpm下離心2分鐘，並使用0.45 μm膜過濾器過濾。 使用高效液相色譜（HPLC，Agilent 1260 Infinity II，Agilent Technologies，加利福尼亞州聖克拉拉）測定藥物濃度，配備C18反相柱（4.6 × 150 mm，5 μm粒徑）。 流動相由甲醇：水（60：40，v/v）組成，含0.1%甲酸，流速為1.0 mL/min。 進樣體積為20 μL，在370 nm（槲皮素）和254 nm（順鉑）波長下進行檢測。 結果表示為在兩個pH水準下隨時間累積的藥物釋放百分比。
細胞培養
HCT116結腸癌細胞在RPMI-1640培養基中培養，培養基補充10%熱滅活胎牛血清（Sigma-Aldrich，英國）、100 μg/mL鏈黴素（Sigma-Aldrich，英國）、50 U/mL青黴素（Sigma-Aldrich，英國）和2 mM L-谷氨醯胺（Sigma-Aldrich，英國）。 在37°C、5% CO2氣氛下維持最佳生長條件。 使用倒置顯微鏡（Leica DMI 6000）定期監測細胞形態和融合度，直到達到70-80%融合度。
細胞毒性評估
將HCT116細胞以5-6 × 10³個細胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100 μL優化培養基，並允許貼壁48小時。 為檢查細胞毒性劑量等效性，在48小時內評估了HCT116細胞在順鉑（0.6、1.2、2.5、5、10、20、40 μg/mL）和Qu-SeNPs（3、6、12、25、50、100、200 μg/mL）各種濃度下的細胞活力。 孵育后，向每孔加入20 μL CellTiter 96 Aqueous One Solution（Promega，威斯康星州麥迪森），含有MTS（3-（4,5-二甲基孵嘳-2-基）-5-（3-羧甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四氮唑）。 將平板在37°C、5% CO2氣氛下孵育2小時，允許MTS還原為甲臜，其與細胞活力成正比。 使用平板讀數器（SPECTRAmax PLUS384）在490 nm處測量吸光度。 實驗進行三次，活力根據以下公式相對於未處理對照組計算：
%細胞毒性 = 100 × （對照組吸光度 – 樣品吸光度） / 對照組吸光度
細胞形態評估
基於我們的初步細胞活力實驗，將細胞暴露於順鉑（18 μg/mL）和Qu-SeNPs（51 μg/mL）的細胞毒性劑量下48小時，並使用光學顯微鏡（Leica DM4000 B LED）觀察HCT116細胞的形態。 檢查細胞形態變化，包括細胞收縮、脫落和融合度降低。
凋亡的流式細胞術分析
使用Annexin V-FITC和PI染色評估凋亡。 使用BD LSRFortessa流式細胞儀對處理和對照細胞進行染色和分析。 通過螢光信號識別早期和晚期凋亡細胞群體，並使用BD FACSDiva軟體（版本8.0.1，BD Biosciences）進行分析。
檢測DNA損傷的彗星實驗
進行彗星實驗以評估DNA鏈斷裂。 使用裂解和電泳緩衝液製備載玻片，然後用溴化乙錠染色。 使用螢光顯微鏡（Zeiss）進行成像。 使用CASP軟體量化DNA損傷，並表示為彗星尾部中總DNA的百分比。
DNA片段化實驗
使用商業DNA提取試劑盒從用18 μg/mL順鉑或51 μg/mL Qu-SeNPs處理48小時的細胞中提取DNA。 然後將提取的DNA進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，以評估片段化模式。 使用BioRad成像系統捕獲結果，以評估與未處理對照細胞相比處理對DNA完整性的影響。
ROS評估
將HCT-116細胞以0.5-1 × 10⁴個細胞/孔的密度接種在96孔板中，並在37°C、5% CO2下孵育過夜。 用順鉑（18 μg/mL）和Qu-SeNPs（51 μg/mL）處理細胞6、24和48小時。 使用2′，7′-二氯二氫螢光素二乙酸酯（DCFH-DA，10 μM; Sigma，產品號D6883）評估細胞內ROS水準。 在37°C黑暗中與DCFH-DA孵育30分鐘后，夜色春藥網官網 夜色春藥網線上網店 夜色春藥熱銷商品推薦 關於夜色春藥網 夜色春藥網獨家資訊 夜色春藥網半價購買 夜色春藥網配送方式 夜色春藥網全部商品 夜色春藥網必買商品 夜色春藥網LINE直購 夜色春藥網折扣活動
用PBS洗滌細胞兩次以去除過量染料。 使用微孔板讀數器（激發485 nm，發射530 nm; DeltaFlex，日本東京）測量螢光。 相對於未處理對照組量化ROS水準，以確定氧化應激的倍數變化。
蛋白質印跡分析
通過蛋白質印跡評估凋亡標誌物Bax、caspase-3和Nrf-2（抗氧化防禦系統的關鍵啟動劑）的蛋白質表達水準。 使用含蛋白酶和磷酸酶抑製劑的RIPA緩衝液提取總蛋白，並使用Bradford法進行定量。 將等量蛋白（每泳道20 μg）通過SDS-PAGE分離，並轉移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。 在室溫下使用TBST（含0.1% Tween-20的Tris緩沖鹽水）中製備的5%脫脂奶粉封閉1小時后，膜在4°C下與一抗孵育過夜。 使用的一抗包括cleaved caspase-3（Sc-22171; 1:1000)、Bax(Sc-6236； 1:2000)、Nrf2(Sc-518033； 1：1000）和β-actin（Sc-8432; 1：1000），均購自Santa Cruz Biotechnology。 經過TBST洗滌后，膜在室溫下與HRP偶聯的二抗孵育1-2小時。 使用增強化學發光（Thermo Fisher Scientific Inc.，馬薩諸塞州）可視化蛋白條帶並進行數位成像。 使用ImageJ軟體（版本1.53t）量化條帶強度，並歸一化為β-actin。
統計分析
使用IBM SPSS版本29進行統計分析。 應用雙因素方差分析（ANOVA）後跟Tukey事後檢驗進行比較。 使用Shapiro-Wilk檢驗調查數據的正態性，並根據Levene檢驗檢查方差同質性。 如果假設被違反，則使用非參數檢驗Kruskal-Wallis。 當p < 0.05時認為結果具有顯著性。
